ABI PCR儀器常見故障維修的原因：

  有很多可能性。這些錯(cuò)誤的來源通常仍然不明。任何故障排除過程的先檢查協(xié)議并重復(fù)實(shí)驗(yàn)。檢查方案并請(qǐng)有經(jīng)驗(yàn)的分子生物學(xué)家審查實(shí)驗(yàn)計(jì)劃很重要。一位博士后研究員的告誡故事是，在意識(shí)到ABI PCR主混合物中缺少dNTP之前運(yùn)行了幾次失敗的PCR，這提醒我們，即使是精疲力盡的科學(xué)家也容易受到簡(jiǎn)單錯(cuò)誤的影響。

  反應(yīng)組分的預(yù)混料中的錯(cuò)誤或問題可能是所有樣品和陽性對(duì)照擴(kuò)增失敗的災(zāi)難性原因。重復(fù)實(shí)驗(yàn)之前，請(qǐng)檢查所有組分及其濃度。如果正在使用新一批試劑，則在進(jìn)行一系列主要實(shí)驗(yàn)之前，對(duì)新舊試劑進(jìn)行對(duì)比。

  切換母料產(chǎn)品時(shí)，必須認(rèn)識(shí)到某些分析方法對(duì)緩沖液成分/退火溫度（T a）/引物濃度組合特別敏感。更改其中任何一項(xiàng)可能會(huì)導(dǎo)致不同的性能。因此，在進(jìn)行徹底更改之前，請(qǐng)驗(yàn)證所選主要混合物中和所有所需儀器上的所有測(cè)定法。查看每種預(yù)混液隨附的說明也很重要，因?yàn)樗鼈冎付酸槍?duì)給定酶，熱啟動(dòng)機(jī)制和緩沖液成分優(yōu)化的推薦條件。

  ABI PCR儀器熱循環(huán)儀故障維修：

  儀器故障可能會(huì)起隱患，因此難以診斷。為避免昂貴的維修費(fèi)用，請(qǐng)確保所有儀器操作員都經(jīng)過全面的培訓(xùn)并受到的監(jiān)督。一些儀器故障會(huì)導(dǎo)致災(zāi)難性故障，從而導(dǎo)致沒有放大或熒光數(shù)據(jù)，而另一些儀器故障會(huì)使數(shù)據(jù)失真或以不均勻的方式處理樣品，從而在相同的生物樣品之間造成人為的差異。將對(duì)照樣品與對(duì)照測(cè)定結(jié)合使用對(duì)于排除故障非常有用。當(dāng)懷疑儀器出現(xiàn)故障時(shí)，應(yīng)在所有孔中進(jìn)行可靠，優(yōu)化的測(cè)定。這種一致性檢查將揭示特定于儀器區(qū)域的問題以及單獨(dú)的測(cè)定和儀器問題。

  ABI PCR儀器探針檢測(cè)失敗維修解決：

   設(shè)計(jì)了基于探針的測(cè)定法來檢測(cè)人cDNA樣品中的EIFB1，但未顯示擴(kuò)增。初始反應(yīng)在ABi StepOne儀器上使用兼容的試劑進(jìn)行。嘗試使用200 nM至900 nM的濃度范圍優(yōu)化引物，但沒有改善。檢驗(yàn)設(shè)計(jì)經(jīng)過驗(yàn)證，發(fā)現(xiàn)適合于靶標(biāo)，并且計(jì)算機(jī)模擬地預(yù)測(cè)這是一種高質(zhì)量的檢驗(yàn)。合成了新的引物，并使用不同的算子SYBR Green I試劑（因此試劑也有所不同）和儀器（Eppendorf Realplex）與原始合成的等分試樣一起運(yùn)行。在采用這種方法時(shí)，我們注意到主要目標(biāo)是解決問題，而次要目標(biāo)是解釋失敗。該反應(yīng)從兩批引物產(chǎn)生了相等的擴(kuò)增。在這個(gè)階段就顯得反應(yīng)問題鋪設(shè)用探針，并因此新的探針合成和兩個(gè)批次是通過在realplex實(shí)時(shí)儀器第二運(yùn)營(yíng)商使用LuminoCt相比®試劑（不同的試劑的那些試圖）。兩種探針均產(chǎn)生擴(kuò)增數(shù)據(jù)，盡管值得注意的是，原始探針已在測(cè)試實(shí)驗(yàn)室之間張貼，因此在室溫下在溶液中放置了幾天，但新探針?biāo)坪醣仍继结樕院谩Ｔ谶@個(gè)階段，很顯然，當(dāng)由LuminoCt第二操作運(yùn)行原始和更換試驗(yàn)都起作用®在realplex實(shí)時(shí)熒光定量?jī)x試劑。因此，原始失敗的其余原因被認(rèn)為是：

  操作員：一位經(jīng)驗(yàn)豐富的科學(xué)家對(duì)該實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了多次重復(fù)，因此，這被認(rèn)為是不太可能的解釋。

  儀器：可能因?yàn)槠渌麢z測(cè)方法失敗而出現(xiàn)問題。

  試劑：測(cè)試簡(jiǎn)單的解釋。該LuminoCt 試劑相比，使用在ABI StepOne擴(kuò)增儀兩個(gè)寡批。反應(yīng)未能與原試劑，但得到了良好的擴(kuò)增，LuminoCt ®試劑