ABI PCR擴(kuò)增儀沒(méi)有信號(hào)故障維修：PCR 用戶有時(shí)會(huì)遇到實(shí)時(shí) PCR 實(shí)驗(yàn)的問(wèn)題。它們的實(shí)時(shí) PCR 曲線沒(méi)有給出信號(hào)，或者它們?cè)陉幮詫?duì)照中與信號(hào)復(fù)雜化。我們將盡力幫助用戶解決您的 PCR 問(wèn)題的主要原因以及如何解決這些問(wèn)題。

  ABI PCR擴(kuò)增儀沒(méi)有信號(hào)故障維修分析：

  PCR 中沒(méi)有模板。您的ABI PCR 中沒(méi)有信號(hào)似乎是一個(gè)微不足道的原因，但請(qǐng)務(wù)必再次檢查您是否已將模板添加到您的 PCR 中。這有時(shí)可以幫助您節(jié)省解決問(wèn)題的時(shí)間和精力。PCR中有抑制劑。您的模板可能包含導(dǎo)致ABI PCR 不良的抑制劑，例如鹽、SDS、苯酚、植物和人體組織或體液。解決方法：使用添加劑（BSA、DMSO、甜菜堿等）來(lái)增強(qiáng)您的 PCR 是合適的。下一個(gè)選項(xiàng)是使用內(nèi)部陽(yáng)性對(duì)照，可以檢查 PCR 的正確性。探頭質(zhì)量或設(shè)計(jì)有問(wèn)題。由于大量?jī)鋈谘h(huán)或錯(cuò)誤的長(zhǎng)期儲(chǔ)存，探頭可能會(huì)部分退化。Generi Biotech 中合成的探針可進(jìn)行 50 次凍融循環(huán)。也有可能是探針設(shè)計(jì)不當(dāng)，沒(méi)有與擴(kuò)增產(chǎn)物結(jié)合。

  如果陰性對(duì)照（或無(wú)模板對(duì)照）中有陽(yáng)性信號(hào)，則可能存在以下一些問(wèn)題：

  您可能已將模板添加到您的 NTC 反應(yīng)中。請(qǐng)重復(fù)分析以排除此問(wèn)題。引物和探針設(shè)計(jì)存在問(wèn)題。您的引物和探針可能會(huì)產(chǎn)生二聚體，而您的ABI PCR 在分析中會(huì)產(chǎn)生假陽(yáng)性信號(hào)。嘗試通過(guò)電泳或熔解分析來(lái)檢查您的 PCR 產(chǎn)物。

  ABI PCR擴(kuò)增儀沒(méi)有信號(hào)故障維修注意事項(xiàng)：

  PCR 的靈敏度要求樣品不受任何外源 DNA 或?qū)嶒?yàn)室環(huán)境中任何先前擴(kuò)增的產(chǎn)物的污染。我們建議使用不同的區(qū)域進(jìn)行樣品制備、PCR 設(shè)置和 PCR 后分析。建議使用配備紫外線燈的層流柜來(lái)制備反應(yīng)混合物。應(yīng)建立兩個(gè)物理上相互分離的站點(diǎn)。建立一個(gè)僅用于 PCR 反應(yīng)設(shè)置的“pre-PCR 區(qū)域”。不應(yīng)將“PCR 后區(qū)域”的物品引入該區(qū)域；這包括筆記本和鋼筆等物品。建立一個(gè)“PCR 后區(qū)”，用于ABI PCR、純化 PCR 擴(kuò)增的 DNA、測(cè)量 DNA 濃度、運(yùn)行瓊脂糖凝膠和分析 PCR 產(chǎn)物。設(shè)備也應(yīng)限制在這些區(qū)域。PCR 儀和電泳儀應(yīng)位于 PCR 后區(qū)域。強(qiáng)烈建議使用帶有氣溶膠過(guò)濾器的移液器和移液器吸頭，僅用于 DNA 樣品和反應(yīng)混合物的制備。其他建議包括：為ABI PCR 前和 PCR 后區(qū)域配備單獨(dú)的移液器和移液器吸頭、實(shí)驗(yàn)室外套、手套箱和廢紙簍。標(biāo)記 PCR 前和 PCR 后項(xiàng)目，因此它們不會(huì)從其指定的工作區(qū)域中移除。遵循 PCR 的黃金法則：切勿將ABI PCR 后區(qū)域中使用的任何試劑、設(shè)備或移液管帶回 PCR 前區(qū)域。單獨(dú)準(zhǔn)備和儲(chǔ)存ABI PCR 試劑，并僅將它們用于指定目的。試劑應(yīng)分小份并儲(chǔ)存在指定區(qū)域，具體取決于它們是用于ABI PCR 前還是 PCR 后應(yīng)用。等分試樣應(yīng)與其他 DNA 樣品分開(kāi)存放。應(yīng)始終執(zhí)行省略模板 DNA 的對(duì)照反應(yīng)，以確認(rèn)不存在污染。此外，ABI PCR 循環(huán)的次數(shù)應(yīng)保持在低限度，因?yàn)楦叨让舾械臋z測(cè)更容易受到污染的影響。